曹艳杰, 何怡宁, 唐宁, 王海勇, 张志鹏, 谢智文, 韦平, 韦天超, 磨美兰. 2016: 三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达. 南方农业学报, 47(8): 1401-1405. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.08.1401
引用本文: 曹艳杰, 何怡宁, 唐宁, 王海勇, 张志鹏, 谢智文, 韦平, 韦天超, 磨美兰. 2016: 三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达. 南方农业学报, 47(8): 1401-1405. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.08.1401
shu
2016: Cloning and prokaryotic expression of Sanhuang chicken STING extracellular domain gene. Journal of Southern Agriculture, 47(8): 1401-1405. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.08.1401
Citation: 2016: Cloning and prokaryotic expression of Sanhuang chicken STING extracellular domain gene. Journal of Southern Agriculture, 47(8): 1401-1405. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.08.1401
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三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达

Cloning and prokaryotic expression of Sanhuang chicken STING extracellular domain gene

    摘要
  • 摘要: 目的克隆鸡干扰素基因刺激蛋白(STING)胞外区基因并进行原核表达,为了解STING蛋白的生物学功能及探讨禽类的固有免疫机制打下基础.方法采用RT-PCR扩增鸡STING胞外区基因,与原核表达载体pGEX-4T-1连接构建重组表达质粒,再转化BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行12% SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析.结果三黄鸡STING胞外区基因全长951 bp,与原核表达载体pGEX-4T-1可成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-STING,转化BL21 (DE3)感受态细胞后经1.0 mmol/L IPTG诱导表达4h,12% SDS-PAGE电泳检测得到一个带GST标签约62 ku的融合蛋白,采用抗GST多克隆抗体进行Western blotting鉴定,约在62 ku处可见一条明显的蛋白印迹条带,表明目的蛋白原核表达正确,且特异性较高.结论从三黄鸡外周血淋巴细胞中克隆获得的STING胞外区基因片段可在原核细胞中高效表达,且纯化后的融合蛋白可用于制备鸡STING多克隆抗体.

     

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