李哲, 贺永国, 黄绵佳, 曾宪海, 林位夫, 刘洁琼, 张春红, 李运合, 马晓晓. 2016: 橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化. 南方农业学报, 47(5): 597-603. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.05.597
引用本文: 李哲, 贺永国, 黄绵佳, 曾宪海, 林位夫, 刘洁琼, 张春红, 李运合, 马晓晓. 2016: 橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化. 南方农业学报, 47(5): 597-603. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.05.597
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2016: Transformation of friable embryogenic callus with HbHMGR1 gene connected with laticifer specific promoter in Hevea brasiliensis. Journal of Southern Agriculture, 47(5): 597-603. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.05.597
Citation: 2016: Transformation of friable embryogenic callus with HbHMGR1 gene connected with laticifer specific promoter in Hevea brasiliensis. Journal of Southern Agriculture, 47(5): 597-603. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.05.597
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橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化

Transformation of friable embryogenic callus with HbHMGR1 gene connected with laticifer specific promoter in Hevea brasiliensis

    摘要
  • 摘要: 目的以3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶1基因(HbHMGR1)乳管表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织,获得抗性转基因材料,为研究HbHMGR1基因的乳管特异性表达及提高橡胶产量打下基础.方法用根癌农杆菌EHA105介导表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR1转化橡胶树品种热研8-79花药易碎胚性愈伤组织,经卡那霉素筛选数月后,对抗性愈伤组织进行GUS染色和分子检测.结果经过对根癌农杆菌侵染的易碎愈伤组织进行4~6个月筛选,得到5个GUS检测呈阳性的抗性愈伤组织系;取其中的2号和11号抗性愈伤组织系进行PCR鉴定,均能扩增出与阳性对照相同的特异片段,uidA、NPTⅡ和PHEV2.1-HbHMGR1序列的目的片段大小分别为829、797和3592bp.2号和11号抗性愈伤组织系经反向PCR鉴定,发现2号抗性愈伤组织系未扩增出目的条带,而11号抗性愈伤组织系扩增获得一条约2000 bp的条带,包含T-DNA序列和一段未知的DNA序列,其中未知DNA序列是橡胶树品种热研8-79基因组的一段连续序列.结论将植物表达载体的T-DNA整合到抗性愈伤组织系基因组DNA中,可获得一个含35S-NPTⅡ-PHEV2.1-HbHMGR1-35S-uidA的转基因愈伤组织系.

     

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