张艳芳, 谢芝勋, 谢丽基, 刘加波, 庞耀珊, 邓显文, 谢志勤, 范晴, 罗思思. 2014: 鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立. 南方农业学报, 45(2): 314-317. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.2.314
引用本文: 张艳芳, 谢芝勋, 谢丽基, 刘加波, 庞耀珊, 邓显文, 谢志勤, 范晴, 罗思思. 2014: 鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立. 南方农业学报, 45(2): 314-317. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.2.314
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2014: Development of a duplex RT-PCR assay for detection of duck tembusu virus and duck plague virus. Journal of Southern Agriculture, 45(2): 314-317. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.2.314
Citation: 2014: Development of a duplex RT-PCR assay for detection of duck tembusu virus and duck plague virus. Journal of Southern Agriculture, 45(2): 314-317. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.2.314
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鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立

Development of a duplex RT-PCR assay for detection of duck tembusu virus and duck plague virus

    摘要
  • 摘要: 目的建立可同时检测鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)与鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)的二重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.方法根据GenBank中DTMUVE基因和DPVUL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PCR.结果l优化后的二重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95℃预变性5 min;95℃1 min,54.4℃l min,72℃1 min,进行35个循环;72℃延伸10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.结论建立的二重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.

     

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