李静, 王永, 杨耀东, 雷新涛, 夏薇. 2014: 棕榈科植物基因克隆方法的优化. 南方农业学报, 45(12): 2123-2128. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2123
引用本文: 李静, 王永, 杨耀东, 雷新涛, 夏薇. 2014: 棕榈科植物基因克隆方法的优化. 南方农业学报, 45(12): 2123-2128. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2123
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LI Jing, WANG Yong, YANG Yao-dong, LEI Xin-tao, XIA Wei. 2014: Optimization of gene cloning methods for Palm plants. Journal of Southern Agriculture, 45(12): 2123-2128. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2123
Citation: LI Jing, WANG Yong, YANG Yao-dong, LEI Xin-tao, XIA Wei. 2014: Optimization of gene cloning methods for Palm plants. Journal of Southern Agriculture, 45(12): 2123-2128. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2123
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棕榈科植物基因克隆方法的优化

Optimization of gene cloning methods for Palm plants

    摘要
  • 摘要: 目的优化棕榈科植物基因克隆方法,为其基因组学研究和分子育种奠定基础.方法通过优化DNA提取和目的片段回收步骤,检测其对提取DNA质量和纯度、目的片段回收率与阳性克隆等的影响.结果DNA提取方法优化后,提取获得的DNA完整性好,无杂质、无弥散现象,质量较好,其OD260/OD280在1.88~1.93;优化前不同样品提取的DNA仅为40.0~60.0 ng/μL,优化后样品DNA在104.5~214.8 ng/μL,为优化前的2~3倍;目的片段回收方法经优化后,可以从扩增的PCR产物中回收获得条带较清晰的目的片段,其胶回收率较高;对回收的目的片段进行亚克隆,以gyspy74引物鉴定阳性克隆,每个样品的菌落均在700 bp左右扩增获得清晰的目的条带,且其中3个菌落的目的条带测序结果与预期核酸序列一致.结论优化后的方法适用于棕榈科植物基因克隆.

     

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