何海旺, 何虎翼, 谭冠宁, 刘义明, 何新民, 唐洲萍, 李丽淑, 王晖. 2014: 反向斑点杂交法快速检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯G病毒. 南方农业学报, 45(1): 43-48. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.1.43
引用本文: 何海旺, 何虎翼, 谭冠宁, 刘义明, 何新民, 唐洲萍, 李丽淑, 王晖. 2014: 反向斑点杂交法快速检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯G病毒. 南方农业学报, 45(1): 43-48. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.1.43
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2014: Detection of SPFMV and SPVG by using reverse dot blot hybridization system. Journal of Southern Agriculture, 45(1): 43-48. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.1.43
Citation: 2014: Detection of SPFMV and SPVG by using reverse dot blot hybridization system. Journal of Southern Agriculture, 45(1): 43-48. DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.1.43
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反向斑点杂交法快速检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯G病毒

Detection of SPFMV and SPVG by using reverse dot blot hybridization system

    摘要
  • 摘要: 目的以克隆得到的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯G病毒(Sweetpotato virusG,SPVG)基因片段为探针建立反向斑点杂交技术体系,应用于甘薯组培脱毒苗带毒情况检测,为生产优质甘薯组培脱毒苗提供保障.方法根据已公布的侵染甘薯的SPFMV和SPVG的核苷酸序列设计两对特异引物,以RT-PCR法从染病的甘薯叶片扩增SPFMV和SPVG的两个片段,并以克隆到的两个病毒片段及内参基因Actin片段为探针建立反向斑点杂交体系.结果分别克隆出长度约310和500 bp的片段,经BLAST比对,所获得的310 bp片段为SPFMV的外壳蛋白基因片段,同源性为97%,500 bp片段为SPVG的外壳蛋白基因片段,同源性为99%.分别用带有SPFMV和SPVG片段的重组质粒pUC-SPFMV和pUC-SPVG进行反向斑点杂交,发现不同病毒能获得单一信号,无交叉现象.以染病甘薯和脱毒甘薯苗为样品,用该种病毒的探针进行反向斑点杂交,染病植株样品中能获得单一信号,而脱毒苗甘薯样品未见任何信号,杂交结果与RT-PCR检测结果一致.结论用建立的反向斑点杂交技术体系能有效检测甘薯中的SPFMV和SPVG,无交叉信号,可用于甘薯组培脱毒苗的前期检测.

     

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