南美白对虾精子超低温冷冻保存技术研究

Spermatozoa cryopreservation of Litopenaeus vannamei

摘要: 目的建立一种南美白对虾精子超低温冷冻保存方法,为南美白对虾优良种质的长期保存奠定基础.方法利用胰蛋白酶消化法获得游离的南美白对虾精子,分别使用灭菌天然海水、无钙人工海水、3%等渗NaCl溶液和0.9%生理盐水作为基础液,并以不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)、甘油、甲醇及其与海藻糖的混合溶液作为抗冻剂,在4种不同降温程序下超低温冷冻保存南美白对虾精子,然后在不同的温度下复苏冷冻精子,以伊红-苯胺黑染色法检测精子存活率.结果使用1.00 g/L胰蛋白酶消化精荚5 min能获得大量游离的南美白对虾精子,以灭菌天然海水为基础液,以10% DMSO和0.25 mol/L海藻糖为抗冻剂,在P-1降温程序(4℃平衡30 min,以-5℃/min的速率降至-20 ℃:-20℃平衡5 min,以-10℃/min的速率降至-80 ℃;-80℃平衡5 min,然后置于液氮中保存)下超低温冷冻保存南美白对虾精子,经37℃水浴复苏后精子存活率最高.结论建立的南美白对虾精子超低温冷冻保存方法具有可行性,为南美白对虾精子冷冻保存库的建立提供了技术支撑.