赵冬敏, 韩凯凯, 刘青涛, 黄欣梅, 杨婧, 刘宇卓, 章丽娇, 田宇杰, 王梦瑶, 李银. 2019: 鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定. 南方农业学报, 50(1): 173-178. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.01.25
引用本文: 赵冬敏, 韩凯凯, 刘青涛, 黄欣梅, 杨婧, 刘宇卓, 章丽娇, 田宇杰, 王梦瑶, 李银. 2019: 鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定. 南方农业学报, 50(1): 173-178. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.01.25
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ZHAO Dong-min, HAN Kai-kai, LIU Qing-tao, HUANG Xin-mei, YANG Jing, LIU Yu-zhuo, ZHANG Li-jiao, TIAN Yu-jie, WANG Meng-yao, LI Yin. 2019: Identification of Tembusu virus receptor protein in the duck embryo fibroblasts. Journal of Southern Agriculture, 50(1): 173-178. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.01.25
Citation: ZHAO Dong-min, HAN Kai-kai, LIU Qing-tao, HUANG Xin-mei, YANG Jing, LIU Yu-zhuo, ZHANG Li-jiao, TIAN Yu-jie, WANG Meng-yao, LI Yin. 2019: Identification of Tembusu virus receptor protein in the duck embryo fibroblasts. Journal of Southern Agriculture, 50(1): 173-178. DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.01.25
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鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定

Identification of Tembusu virus receptor protein in the duck embryo fibroblasts

    摘要
  • 摘要: 目的拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础.方法取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)验证后通过LC-MSMS质谱分析进行鉴定;同时人工合成鸭热休克蛋白70基因(HSP70)序列的开放阅读框(1905 bp),构建重组质粒pET32a-HSP70并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,以重组蛋白免疫小鼠制备抗鸭HSP70血清,与DEF细胞共孵育后接种坦布苏病毒,并采用实时荧光定量PCR检测抗血清对病毒感染的抑制作用.结果DEF膜蛋白中分子量约70 kD的蛋白可与坦布苏病毒结合,经LC-MSMS质谱分析和序列比对可确定该蛋白即为鸭热休克蛋白70(HSP70).含重组质粒pET32a-HSP70的BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE检测发现在分子量约85 kD处出现目的蛋白条带,获得的重组鸭HSP70蛋白主要以包涵体形式进行表达,且能与His标签抗体发生特异性反应.以重组鸭HSP70蛋白免疫小鼠获得的抗鸭HSP70血清可封闭DEF细胞上的HSP70,而竞争性抑制坦布苏病毒感染.结论HSP70是坦布苏病毒感染DEF细胞的受体,可作为新的靶点用于抗坦布苏病毒药物设计.

     

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