摘要: 目的对毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP2和PtCP进行原核表达及重组蛋白纯化,为进一步研究该基因的酶学特征和生理功能打下基础.方法从毛果杨中克隆两个半胱氨酸蛋白酶基因PtCP2和PtCP4,构建其原核表达载体pET-30a-PtCP2及pET-30a-PtCP4,并在转入大肠杆菌后在体外诱导表达重组蛋白,采用包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化.结果PtCP2基因CDS序列全长1107bp,编码368个氨基酸;PtCP4基因CDS序列全长1104bp,编码367个氨基酸.PtCP2和PtCP4基因编码的蛋白均属于RD19A-like类型木瓜蛋白酶.PtCP2和PtCP4基因在毛果杨根、茎、叶中均有表达,其中PtCP2在叶中表达量最高,PtCP4在根中表达量最高.通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白PtCP2和PtCP4,切除信号肽后蛋白酶大小分别为38.151和38.069kD.结论原核表达获得的纯化重组蛋白PtCP2和PtCP4可用于进一步研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶的酶学特征和生理功能.