摘要: 目的明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(SspA)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础.方法针对SspA基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以SspA基因的重组质粒pET28a-SspN、pET28a-SspM和pET28a-SspC分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性.结果SspA基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大.在IPTG诱导下,含有重组质粒pET28a-SspN、pET28a-SspM和pET28a-SspC的菌株表达出3段融合蛋白,其中,SspN和SspC重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而SspM重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:SspN重组蛋白66 kD,SspM重组蛋白65 kD,SspC重组蛋白32 kD.Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以SspN重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应.结论2型猪链球菌SspA基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的SspN蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段.