摘要: 目的建立用于检测禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)且能同时区分H1和H3亚型AIV的方法,为有效防控禽流感(Avian influenza,AI)奠定基础.方法根据H1亚型、H3亚型AIV-HA基因和M基因的保守核苷酸序列,分别设计3对特异性引物,以含有H1亚型AIV和H3亚型AIV的cDNA为模板,对三重PCR扩增条件进行优化,验证其特异性和敏感性,并对临床样品进行AIV检测.结果H1和H3亚型AIV混合模板经三重PCR扩增可获得3条特异性条带,其中302 bp为H1亚型HA基因、453bp为M基因、626 bp为H3亚型HA基因;含有H1或H3亚型AIV的模板均出现两条特异性条带,大小分别为302和453bp、453和626 bp;含有其他亚型AIV的模板仅出现一条特异性条带(453bp);而其他禽呼吸道疾病病毒均未扩增出任何条带.优化后的三重PCR最低能同时检测出7.00 pg的H1亚型AIV、3.62 pg的M基因和20.60 pg的H3亚型AIV;对100个临床样品进行AIV检测,AIV总阳性率为36%,其中H1亚型阳性率4%、H3亚型阳性率9%、其他亚型阳性率23%.结论禽流感病毒H1、H3亚型和M基因三重PCR检测方法具有快速、敏感、特异等特点,适用于AIV的检测及H1和H3亚型AIV的分型检测.