基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

吕丽兰; 张娅; 邹承武; 甘志勇; 吴静娜; 李乾坤; 吕玉莲; 易国强; 温绍聪; 何丽珊

doi:10.3969/j.issn.2095-1191.2020.05.026

基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

广西亚热带作物研究所/农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南宁)/农业农村部亚热带果品蔬菜质量监督检验测试中心,南宁,530001
广西大学农学院/广西农业环境与农产品安全重点实验室,南宁,530004

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中图分类号: 45-1381/S
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- 刊出日期: 2020-05-29

Establishment of indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay based on specific parathion monoclonal antibody

摘要

摘要: [目的]制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持.[方法]以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株.再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性.采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性.[结果]成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10.以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应.对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好.[结论]建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留.
- 对硫磷 /
- 间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA) /
- 单克隆抗体 /
- 气相色谱法(GC)

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施引文献(3)

期刊类型引用(2)

1.	卢春霞，刘长彬，万鹏程，郭延华，陈霞，李红敏，卢守亮. 绵羊ovPAG7间接竞争酶联适配体检测方法的建立与应用. 江苏农业学报. 2022(03): 730-738 . 百度学术
2.	耿建暖. 酶联免疫法及其在食品中的应用研究进展. 黑龙江畜牧兽医. 2021(19): 40-44 . 百度学术

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